Большая техническая энциклопедия
0 1 3 4 9
D V
А Б В Г Д Е Ж З И Й К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Ь Э Ю Я
ОБ ОГ ОД ОЕ ОЖ ОЗ ОЙ ОК ОЛ ОМ ОН ОО ОП ОР ОС ОТ ОФ ОХ ОЦ ОЧ

Осадок - гликоген

 
Осадок гликогена отделяют центрифугированием, подсушивают на воздухе, растворяют в 2 5 мл дистиллированной оды и проводят колориметрическое определение, как указано выше.
Часть осадка гликогена растворяют в горячей воде. После остывания к содержимому пробирки добавляют 2 капли раствора Люголя. Появляется красновато - бурое ( иногда с фиолетовым оттенком) окрашивание.
Реактивы: а) осадок гликогена; б) соляная кислота, 3 / сг ьш раствор; в) кдкий натр, 15 % - ный раствор; г) реактивы для реакции Троммера.
В этом случае осадок гликогена после гомогенизирования в 2 - 3 объемах дистиллированной воды подвергают диализу против дистиллированной воды ( с пятикратной сменой через каждые 2 ч), а затем сушат с помощью лиофильной сушки.
К 5 каплям жидкости, содержащей гликоген, добавляют 5 - 10 капель спирта. Жидкость мутнеет, а при стоянии выпадает осадок гликогена.
В центрифужную пробирку берут 25 - 100 мг исследуемой ткани, 1 мл гомогената или безбелкового фильтрата, добавляют 3 мл 30 % - ного раствора КОН и нагревают в кипящей водяной бане в течение 20 мин. Затем пробы охлаждают, добавляют равный объем ( 4 мл) спирта, хорошо перемешивают стеклянной палочкой и помещают в кипящую водяную баню. Когда спирт закипит, пробы охлаждают и осадок гликогена отделяют центрифугированием в течение 15 мин при 3000 об / мин.
Полученный экстракт центрифугируют при 3000 об / мин в течение 20 мин. При содержании в печени большого количества гликогена су-пернатант представляет собой жидкость молочного цвета. Ее сливают в стакан, а осадок снова растирают с равным объемом 3 % - ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют и второй супернатант объединяют с первым. Если гликогена в печени мало и первый экстракт представляет только опалесцирующий раствор, то второй экстракции не проводят. К раствору гликогена приливают равный объем 96 % - ного этанола и тщательно перемешивают Осадок гликогена собирают центрифугированием при 3000 об / мин в течение 30 мин, а затем гомогенизируют в 2 - 3 объемах, бидистиллированной воды. Приливают равный объем этанола, перемешивают и снова центрифугируют. Эту операцию повторяют 3 - 4 раза, после чего осадок гликогена промывают два раза 96 % - ным этанолом и высушивают в ваку-умэксикаторе над свежепрокаленным хлористым кальцием.
Через 6 - 8 часов животное убивают, быстро вырезают печень и тотчас, разрезав на куски, растирают с отмытым песком. Продолжая растирать, добавляют U / 2 объема 3 % трихлоруксусной кислоты и отсасывают. Фильтрат собирают в стакан. Остаток вторично экстрагируют равным объемом 3 % трихлоруксусной кислоты. К соединенному фильтрату добавляют равный объем 95 % спирта при помешивании. Осадок гликогена отделяют центрифугированием. Полученный осадок растворяют, взбалтывая с 2 - 3 объемами воды, и снова осаждают равным ( по отношению к воде) объемом спирта. Эту операцию повторяют 3 - 4 раза. Далее гликоген дважды промывают 95 % спиртом и высушивают в эксикаторе над хлористым кальцием.
Полученный экстракт центрифугируют при 3000 об / мин в течение 20 мин. При содержании в печени большого количества гликогена су-пернатант представляет собой жидкость молочного цвета. Ее сливают в стакан, а осадок снова растирают с равным объемом 3 % - ного раствора трихлоруксусной кислоты, центрифугируют и второй супернатант объединяют с первым. Если гликогена в печени мало и первый экстракт представляет только опалесцирующий раствор, то второй экстракции не проводят. К раствору гликогена приливают равный объем 96 % - ного этанола и тщательно перемешивают Осадок гликогена собирают центрифугированием при 3000 об / мин в течение 30 мин, а затем гомогенизируют в 2 - 3 объемах, бидистиллированной воды. Приливают равный объем этанола, перемешивают и снова центрифугируют. Эту операцию повторяют 3 - 4 раза, после чего осадок гликогена промывают два раза 96 % - ным этанолом и высушивают в ваку-умэксикаторе над свежепрокаленным хлористым кальцием.
Замороженную ткань ( - 30 г) помещают в механический гомогенизатор с 300 мл диметилсульфоксида и перемешивают - 2 мин. Смесь центрифугируют в течение 20 мин при 1800 об / мин, надосадочный раствор фильтруют через фильтровальную бумагу ватман № 54 с отсасыванием и быстро выливают в 3 л метанола, содержащего 5 г хлористого натрия. Остаток после центрифугирования снова экстрагируют 300 мл диметилсульфоксида тем же способом и профильтрованный надосадочный раствор прибавляют к тому же метанольному раствору. Светло-коричневый осадок сырого гликогена отделяют декантацией и центрифугированием и растворяют в 80 - 100 мл диметилсульфоксида. Раствор центрифугируют при помощи настольной центрифуги ( 6500 об / мин) и гликоген осаждают из надосадоч-ного раствора 3 объемами спирта. Процедуру повторяют дважды с уменьшающимися количествами диметилсульфоксида, пока раствор гликогена не станет почти бесцветным и лишь слегка опалесцирующим. Затем продолжают очистку тем же способом, применяя вместо диметилсульфоксида воду, чтобы растворить осадок частично очищенного гликогена. Водный слой отделяют и центрифугируют при - 6500 об / мин в течение 1 час. Процедуру повторяют несколько раз, последний надосадочный раствор диализуют против холодной дистиллированной воды и лиофилизуют.
 
Loading
на заглавную 10 самыхСловариО сайтеОбратная связь к началу страницы

© 2008 - 2019
словарь online
электро бритва
словарь
одноклассники
XHTML | CSS
Лицензиар ngpedia.ru
1.8.11