Большая техническая энциклопедия
2 3 6
A N P Q R S U
А Б В Г Д Е Ж З И К Л М Н О П Р С Т У Ф Х Ц Ч Ш Щ Э Ю Я
О- ОБ ОВ ОГ ОД ОЖ ОК ОЛ ОН ОП ОР ОС ОТ ОФ ОХ ОЦ ОЧ ОЩ

Овальбумин

 
Овальбумин является наиболее доступным54 гликопротеином, послужившим первым объектом серьезного химического изучения гликопротеинов. Овальбумин содержит одну углеводную цепь и относится поэтому к гликопротеинам типа I ( см. стр.
Овальбумин 84 Оверхаузера эффект 34 Окисление анодное 207 периодатное 82 ел.
В противоположность овальбумину поляризация серум-альбумина зависит от рН среды; это связано, по-видимому, с наличием диссоциации.
Вебером исследовано также влияние на овальбумин температуры, кислот и других факторов. Наблюдаемое в ряде случаев увеличение времени релаксации вращения автор объясняет ассоциацией макромолекул, осуществляющейся, по-видимому, водородными связями. Не останавливаясь подробно на результатах этих работ, важных для биохимии, отметим только, что поляризационный метод оказался весьма плодотворным.
Необходимое количество белкового антигена ( например, 500 мг овальбумина) растворяют в 10 мл физиологического раствора хлористого натрия, содержащего 1 % фенола. К раствору антигена добавляют 10 мл одного из имеющихся в продаже эмульгаторов, производных ланолина ( аквафор фирмы Duke Lab.
В составе транскрипционной единицы в ряде случаев ( например, 1ен овальбумина птиц) обнаруживается более одного сигнала поли-дденилирования. Сигналы полиаденилированкя могут находиться в разных участках гена. Выбор одного из возможных сигналов полиаденилирования, вслед за которым следует эндонуклеазное расщепление транскрипта, может также рассматриваться как способ регуляции экспрессии гена, обеспечивающий нужное направление З - процессинга с образованием мРНК данного типа. Информационная РНК, кодирующая кальцитонин, образуется путем сплайсинга первых четырех экзонов гена, причем последний экзон содержит сигнал полиаденилирования, узнаваемый в клетках щитовидной железы. Функции белка, кодируемого этим типом мРНК, не известны. Несомненно, выбор одного из возможных сайтов полиаденилирова-мия играет роль в тканеспецифической экспрессии генов.
В составе транскрипционной единицы в ряде случаев ( например, 1ен овальбумина птиц) обнаруживается более одного сигнала поли-дденилирования. Сигналы полиаденилированкя могут находиться в разных участках гена. Выбор одного из возможных сигналов полиаденилирования, вслед за которым следует эндонуклеазное расщепление транскрипта, может также рассматриваться как способ регуляции экспрессии гена, обеспечивающий нужное направление 3 -процессии га с образованием мРНК данного типа. Информационная РНК, кодирующая кальцитонин, образуется путем сплайсинга первых четырех экзонов гена, причем последний экзон содержит сигнал полиаденилирования, узнаваемый в клетках щитовидной железы. Функции белка, кодируемого этим типом мРНК, не известны. Несомненно, выбор одного из возможных сайтов полиаденилирова-иия играет роль в тканеспецифической экспрессии генов.
Харуна и Акабори [21 ] выделили 35 кислых ДНФ-производных пептидов после частичного гидразинолиза овальбумина ( 20 г.), в результате обработки белка гидразином ( 100 г) при 100 в течение 3 час. В этих условиях только 0 3 моль С-концевой аминокислоты было обнаружено в свободном виде. Оказалось, что большие количества ДНФ-пептидов лучше предварительно разделять методом противоточного распределения, а затем применять хроматографию на колонках.
Встречаются вместе с глобулинами, например, в виде серум -, лакт - и овальбумина соответственно в плазме крови, в молоке и яйцах.
Второй способ применяли для иммобилизации антител к каннабиоидам и гидазепаму и конъюгатов этих наркотиков с овальбумином на поверхность латекса, содержащего карбоксильные, амино - и альдегидные группы.
Белок куриного яйца состоит из смеси гликопротеинов, из которых лучше всего изучены яичный альбумин ( овальбумин), составляющий около 60 % белка, и овомукоид, составляющий около 10 - 15 % белка.
Зависимость относительного числа клеток в суспензии Е. coli от содержания в ней хитозана ( 1 и ПЭИ ( 2 - 4 для исходной куль-туральной жидкости ( 1 2, суспензии клеток, отмытых 0 1 М раствором NaCI ( 3, и суспензии клеток, отмытых 0 1 М раствором NaCI и адсорбировавших декстран ( 4. Дополнительные сведения о характере взаимодействия продуктов клеточного метаболизма полимерной природы получены в модельных опытах с использованием овальбумина, полиэтиленимина и хитозана. Добавление поликатионита в оптически прозрачный раствор белка приводит к появлению мутности в результате образования гетерофазы. С использованием метода электронной микроскопии установлено [134], что в процессе флокуляции нативных суспензий E. ПЭК, образующиеся путем интерполимерных реакций внеклеточных продуктов метаболизма и поликатионитов, которые по своему строению напоминают агрегаты флокулянт-овальбумин. В работе [135] обнаружена зависимость скорости седиментации клеток суспензии E. Если добавки белков и липидов ускоряют осаждение клеток, то введение декстра-на снижает скорость этого процесса из-за гидрофилизации клеточной поверхности, затрудняющей адсорбцию флокулянтов. Сходные данные получены при изучении флокуляции бактериальных суспензий Leuconostoc mesenteroides полистиролсульфонатом. Показано, что с увеличением времени культивирования агрегативная устойчивость суспензий клеток возрастает, что связано с биосинтезом декстрана, оказывающего защитное действие на клетки.
Схема, иллюстрирующая действие эстрогена на клетки-мишени в яйцеводе курицы. Будучи жирорастворимым соединением, эстроген проходит через клеточную мембрану и связывается с эстрогеиным рецептором-белком с коэффициентом седиментации 4S. Далее эстро-ген-рецепторный комплекс превращается в активную 58-форму и в качестве вторичного посредника проникает в ядро, где, взаимодействуя со специфическими участками хроматина, вызывает транскрипцию определенных генов с образованием соответствующих мРНК. Последние выходят из ядра и используются в качестве матриц белкового синтеза на рибосомах, В результате синтезируется ряд белков, характерных для яйцеводов в стимулированном состоянии, например овальбумин. Например, введение эстрадиола цыплятам вызывает значительное увеличение скорости синтеза в яйцеводе особых белков яйца, в частности овальбумина и ововителлина. Таким путем эстрадиол подготавливает яичник к формированию яиц.

Дальнейшими опытами, на описании которых мы здесь не будем останавливаться, было установлено, что чистые препараты серумаль-бумина, овальбумина и казеина, подобно нормальной сыворотке, активируют действие как пергидридазы, так и фенолазы.
Изменение градиента рН в геле по направлению от анода ( слева к катоду ( справа через 10 мин ( 1 и 30 мин ( 2 после начала фокусирования. Диапазон рН амфолитов 3 - 10. Электрофокусирование образца, нанесенного в виде узкой зойы, осуществляется быстрее по сравнению с образцом, распределенным по всему, гелю 1 ( для овальбумина и гемоглобина это время составляет.
Классификация и основные свойства ЛП сыворотки крови человека. К белкам этого класса относятся казеиноген молока, в котором содержание фосфорной кислоты достигает 1 %; вителлин, вителлинин и фосвитин, выделенные из желтка куриного яйца; овальбумин, открытый в белке куриного яйца; ихтулин, содержащийся в икре рыб, и др. Большое количество фосфопротеинов содержится в клетках ЦНС. Фосфопротеины занимают особое положение в биохимии фосфорсодержащих соединений не только в результате своеобразия структурной организации, но и вследствие широкого диапазона функций в метаболизме.
К типичным гликопротеинам относят большинство белковых гормонов, секретируемые в жидкие среды организма вещества, мембранные сложные белки, все антитела ( иммуноглобулины), белки плазмы крови, молока, овальбумин, интерфероны, факторы комплемента, группы крови, рецеп-торные белки и др. Из этого далеко не полного перечня гликопротеинов видно, что все они выполняют специфические функции: обеспечивают клеточную адгезию, молекулярное и клеточное узнавание, антигенную активность опухолевых клеток, оказывают защитное и гормональное, а также антивирусное действие.
Например, в 1979 г. было описано фракционирование нативных белков с молекулярными массами 12 - 68 тыс. Дальтон на колонках Lichrosorb-DIOL ( 5 мкм) размерами 0 6 х 25 и 2 3 х 25 см. Авторы сообщили об успешном разделении классического набора стандартных белков ( БСА, овальбумин, химотрипсиногеп, лизоцим, цитохром с), о линейной зависимости log M от VR и подчеркнули, что все фракционирование у них занимало 6 мин. Если мы сравним эту цифру с той, что была приведена выше при описании построения калибровочного графика ( см. рис. 72) для сефадекса G-75 Superfine с использованием тех же белков, то увидим, что скорости элюции различаются более чем в 100 раз. Возникает вопрос - правомерно ли такое увеличение скорости, если иметь в виду, что средний диаметр гранул уменьшен только в 5 - 6 раз. Успевает ли установиться равновесие поперечной диффузии между фазами. Имеется ли выигрыш в эффективности разделения фракций, который можно ожидать от ЖХВД, или авторы пожертвовали им ради скорости процесса. Кстати говоря, такая жертва может быть целесообразной при работе с очень лабильными белками, но в большинстве случаев биохимик-исследователь, вероятно, предпочел бы увеличить длительность опыта до часа или даже нескольких часов, если бы это сулило ему существенный выигрыш в разрешении белковых фракций. Только ради экономии времени вряд ли имеет смысл в биохимической лаборатории идти на внушительные затраты средств, связанные с приобретением колонок и аппаратуры для ЖХВД.
Овальбумин является наиболее доступным54 гликопротеином, послужившим первым объектом серьезного химического изучения гликопротеинов. Овальбумин содержит одну углеводную цепь и относится поэтому к гликопротеинам типа I ( см. стр.
Состав кристаллического овальбумина - основного протеина яичного белка - установлен с большой степенью точности. Насколько авторам известно, до сих пор не было проведено сравнительного исследования содержания основных аминокислот в кристаллических альбуминах куриного яйца и яйцах других животных. Белок яйца содержит, невидимому, больше лизина, чем кристаллический альбумин. Однако это различие вызвано, вероятно, техническими причинами и не имеет большого значения.
Принято считать, что процесс денатурации сопровождается раскручиванием полипептидных цепей, изменением структуры, характерной для природного белка. В коагуляте денатурированного гемоглобина или денатурированного овальбумина раскрученные полипептидные цепи различных молекул данного белка настолько переплетены между собой, что их уже нельзя разделить, чем и объясняется нерастворимость денатурированного белка. Некоторые химические реагенты, к числу которых относятся сильные кислоты, сильные щелочи и спирты, служат сильными денатурирующими средствами.
В высших организмах менее 10 % общей нуклеотидной последовательности структурного гена, так называемые структурные зоны [78, 79], кодируют белок. Исследования генов, кодирующих глобин, овальбумин, а также некоторые белки SV40 и вируса полиомы, подтверждают мозаичный характер эукариотического структурного гена. Нуклеотидные последовательности ДНК, которые транслируются в аминокислотные последовательности, не монотонны по строению, а прерываются участками нетранслнрующенся ДНК.
Имеются, кроме того, достоверные данные о том, что интроны часто оказываются длиннее экзонов и что внутри гена на интроны приходится значительно большая часть нуклеотид-ных пар. Подсчитано, например, что ген овальбумина содержит 7 нитронов, в общей сложности насчитывающих 7700 пар оснований, в то время как сформировавшаяся после сплайсинга мРНК насчитывает всего 1859 оснований. Почти во всех эукариотических клетках синтезированные на структурных генах первичные транскрипты подвергаются процессингу, прежде чем выполнят свои уникальные функции в белковом синтезе. Во многих случаях процессинг имеет место главным образом в ядре, хотя этот процесс продолжается и после транспортировки молекул РНК из ядра в цитоплазму: например, терминальные реакции полиаденилирования и метилирования остатков нуклеозидов.
Иногда значения степени спиральности, вычисленные из [ а ] и &0, неплохо согласуются друг с другом. Иногда же, как в случае инсулина, овальбумина, лактоглобулина, наблюдаются резкие расхождения между данными. Для р-бензиласпартата Ь0 600, что прекрасно согласуется со 100 % левой спирализацпей.
Не обнаруживаются нуклеосомы и в регуляторных участках генов овальбумина кур, активных в клетках яйцевода, а также глоби-новых генов.
Нуклеосомы отсутствуют и в области потенциально активного промотора РНК-полимеразы II, даже когда транскрипция еще не началась. Не обнаруживаются нуклеосомы и в регуляторных участках генов овальбумина кур, активных в клетках яйцевода, а также глоби - НОЕЫХ генов.

Фосфопротеиды ( казеин) имеют фосфорсодержащие группы, глюкопротеиды ( муцин, овальбумин) содержат углеводы, нуклеопро-теиды - нуклеиновые кислоты.
В самое последнее время возникли сомнения в справедливости правила, что максимальное растекание протеинов имеет место в изо-электрической точке. Предварительные измерения Аскью и Даниэлян показали, что на границе между бромобензолом и водными растворами овальбумин дает в изоэлектрической точке минимум растекания.
В результате такие клетки синтезировали большое число дополнительных копий продукта этого гена. Среди них можно назвать гены инсулина, гипофизарного гормона роста ( соматотропина), а - и р-глобинов, рРНК, соматостатина и овальбумина. Была осуществлена и обратная рекомбинация: бактериальные гены были введены в геном ряда эукариотических клеток.
Для некоторых белков, например БСА, выход оказывается одинаковым во всех случаях ( 100 %), в то время как для овальбумина разница уровней выхода очень существенна: 35, 78, 57, 22 и 8 % соответственно.
В настоящее время твердо установлено наличие О-гликозидной связи через оксиаминокислочы ( тип F) для муцинов подчелюстных желез, групповых веществ крови, комплекса гепарина с белком и др. и N-ацил-гликозиламинной связи через аспарагиновую и, вероятно, глутаминовую кислоту ( тип Е) для овальбумина, орозомукоида и других гликопротеинов. Знаменательно, что для образования указанных гликопептидных связей необходимо присутствие специфических аминокислот - оксиамино-кислот и двухосновных кислот, которые обязательно входят в состав природных гликопротеинов в количествах, иногда значительно превышающих их содержание в обычных белках.
Изучение изменения интенсивности флуоресценции с изменением температуры позволяет определить энергию образования комплекса. С помощью флуоресценции легко наблюдать конформационные изменения, приводящие к изменению энергии комплексообразования. Так, раствор натив-ного овальбумина и полиглутаминовой кислоты не флуоресцирует в присутствии бланкофора ВА, но, если водный раствор прокипятить и быстро охладить до комнатной температуры, появляется интенсивная флуоресценция. Этот метод может быть использован для изучения обратимых а-р-превраще-ний в полипептидах и нуклеиновых кислотах.
Гепарин и хондроитинсульфат, которые ранее считали полисахаридами, соединены с белками щелсчелабильными связями. В то же время многие углевод-пептидные полимеры имеют стабильную к щелочи связь углеводов с аминокислотами. Подобной деструкцией яичного альбумина ( овальбумина) [64] и овомукоида удалось получить гетеросахариды, соединенные только с одной аспарагиновой кислотой. Связь этой аминокислоты с остатком углевода устойчива в щелочной среде и более устойчива в кислой среде, чем гликозидные связи. После частичного кислотного гидролиза такого гетеросахарида, связанного с остатком аминокислоты, удалось получить низкомолекулярный фрагмент, состоящий из аспарагиновой кислоты и N-ацетилглюкозамина. При кислотном гидролизе этого соединения выделяются аммиак, аспарагиновая кислота и 2 - ами1НО - 2-дезоксиглю копираноза.
При градиентном элюировании у-глобулина человека был получен очень широкий пик в зоне от 0 005 до 0 13 М фосфата при рН 7 0 в присутствии 0 2 М раствора NaCl. При рехроматографии отдельных частей зоны получены небольшие пики в предполагаемых местах. Были изучены также другие белки, например овальбумин, лизоцим, протаминсульфат и гемоцианин улитки. На колонках из фосфата кальция очищены каталаза печени [7] ( мол. Описан интересный опыт по отделению лактальбумина от других белков.
Несмотря на большое количество примеров, когда секреторные и внутримембранные белки синтезируются с отщепляемой сигнальной N-концевой последовательностью, это, по-видимому, не есть общее правило. Некоторые белки, как оказалось, тоже синтезируются на мембраносвязанных рибосомах, но без отщепления N-концевой или какой-либо иной сигнальной последовательности. К ним относится такой типичный секреторный белок, как овальбумин, а также мембранные белки цитохром Р-450, эпоксидгидратаза, ретинальный опсин, гликопротеид РЕа вируса Синдбис. В этих случаях растущая полипептидная цепь тоже, по-видимому, имеет сигнальную последовательность, индуцирующую присоединение транслирующей рибосомы к мембране эндоплазматического ретику-лума и ко-трансляционный транспорт белка в мембрану, но без сопутствующего процессинга. Для цитохрома Р-450 показано, что его N-концевая последовательность гидрофобна и напоминает сигнальную, но она сохраняется у зрелого белка. Однако N-концевые последовательности овальбумина и опсина не похожи на обычную сигнальную последовательность. Возможно, что либо сигнальную роль здесь выполняют специальные внутренние гидрофобные участки растущего полипептида, либо не столь гидрофобная N-концевая последовательность тоже в каких-то случаях может служить сигналом для присоединения к мембране. Как и в других случаях, взаимодействие с мембраной возможно лишь в течение трансляции; но не после нее; очевидно, сворачивание завершенной цепи как-то блокирует ( экранирует) сигнальную функцию соответствующего участка.
Было предложено также использовать яйцо с его высоким содержанием белка в качестве источника белковых продуктов, использующихся в фармацевтической промышленности. Экспрессия трансгена в клетках репродуктивного пути курицы, где обычно секретируется большое количество овальбумина, может способствовать накоплению соответствующего белкового продукта в яйце, откуда его можно затем выделить.
В результате такого нагревания он коагулирует, образуя нерастворимый коагулят кирпично-крас-ного цвета. Большинство других белков также денатурируется при нагревании приблизительно до такой же температуры. При нагревании его раствора примерно до 65 С и выдерживании в течение некоторого времени при этой температуре овальбумин денатурируется, давая нерастворимый белый коагулят. Это явление наблюдается при варке яиц.
Для того чтобы ликвидировать некоторые недостатки радио-иммуноанализа, такие, как нестабильность радиоактивно-меченных белков или денатурацию белков при введении метки, Хайман и Бломмен [466] применили флуоресцентную антисыворотку или антиген вместо радиоактивных. Первый тип изучен с использованием иммуноглобулина G человека и иммуноглобулина М мыши, а также последнего с овальбумином. В качестве меток применялись флуоресцеин или тетраметилродаминизотиоциа-нат.
Линейные полимеры по своей природе обладают двумя функциональными группами на цепь независимо от ее длины Linear polymers by their very nature possess two functional groups per chain, independent of its length. Независимо oi природы активности метакрилата, она легко уничтожается атомами водорода и молекулами иода, а активность хлоропре-на уничтожается кислородом. Whatever its nature, the activity of methacrylate is readily destroyed by hydrogen atoms and iodine molecules, and that of chloroprene by oxygen Препараты овальбумина и АСТН не адсорбировались независимо от рН первоначального буфера.
Аминокислотный состав альбуминов разнообразен и характеризуется очень низким содержанием или полным отсутствием глицина и сравнительно высоким содержанием ци-стина и метионина. Растворимы в воде и осаждаются из растворов при нейтральной реакции лишь при полном насыщении сернокислым аммонием. К ним относятся: лактальбумин, овальбумин, серум альбумин, миоальбумин и миоген.
Важнейшие фибриллярные белки животных - это кератин и коллаген; белок кератин входит в состав волос, ногтей, мышц, рогов, игл и перьев; коллаген - структурный компонент сухожилий, кожи, костей, соединительной ткани. При кипячении коллаген гидролизуется и образует растворимый в воде белок, называемый желатиной. В теле человека имеются растворимые белки, именуемые глобулярными белками. Альбумины, такие, как сывороточный альбумин, получаемый из крови животных, овальбумин яичного белка, лактальбумин молока, растворяются в холодной воде и слабом растворе соли. Глобулины, например глобулины плазмы крови, фибриноген, глобулин яичного белка, глобулин молока, растворяются в разбавленных растворах солей, но не в холодной воде.

В гликопротеинах преобладает белковый фрагмент, в связи с чем они имеют ряд структурных особенностей, отличающих их от полимеров первой группы. Углеводные фрагменты этих соединений наиболее часто представлены поли - и олигосахаридами нерегулярного строения. Степень полимеризации моносахаридов в цепях невелика. В гликопротеинах подчелюстной железы быка и овцы углеводная простетическая группа представлена дисахаридом, в овальбумине - октасахаридом, в орозомукоиде найден декасахарид, в фетуине содержится 17 углеводных остатков. Типичными моносахаридными звеньями в этих веществах являются аминосахара, галактоза, фукоза и нейраминоеая кислота, присоединенная к концам углеводных фрагментов.
Вставочные последовательности ( интроны в двух эукариотических генах. Ген овальбумина содержит шесть нитронов ( они обозначены серым цветом и буквами A-F и, следовательно, разделен на семь участков, или экзонов ( указаны красным цветом и цифрами 1 - 7, В гене цитохрома Ь присутствуют четыре интрона ( серые, A-D и пять экзонов ( красные, 1 - 5. В обоих случаях интроны составляют большую часть ДНК гена. Указано число оснований, входящих в состав интронов гена цитохрома Ь. Многие эукариотические гены ( может быть, даже большинство их) обладают весьма загадочной структурной особенностью, которая состоит в том, что в их нуклеотидную последовательность вставлен участок ДНК, не кодирующий аминокислотную последовательность полипептидного продукта. Такие нетранслируемые участки ДНК в генах называют вставочными последовательностями, или нитронами, тогда как участки гена, кодирующие аминокислотную последовательность полипептида, называют экзонами. Хорошо известным примером может служить ген, кодирующий единственную полипептидную цепь яичного белка - аваль бумина. На рис. 27 - 29 видно, что в этом гене присутствуют шесть интронов, которые разделяют ген овальбумина на семь экзонов. Видно также, что интроны в этом гене гораздо длиннее экзонов-суммарная длина всех интронов составляет 85 % общей длины ДНК гена. За немногими исключениями, все изученные к настоящему времени эукариотические гены содержат интроны, которые различаются по числу, по месту расположения, а также по тому, какую часть общей длины гена они занимают. Например, ген сывороточного альбумина содержит 6 интронов, ген белка кональбумина куриных яиц - 17 интронов, а ген коллагена-свыше 50 интронов. Исключение составляют гены гистонов, которые, по-видимому, не содержат интронов.
Несмотря на большое количество примеров, когда секреторные и внутримембранные белки синтезируются с отщепляемой сигнальной N-концевой последовательностью, это, по-видимому, не есть общее правило. Некоторые белки, как оказалось, тоже синтезируются на мембраносвязанных рибосомах, но без отщепления N-концевой или какой-либо иной сигнальной последовательности. К ним относится такой типичный секреторный белок, как овальбумин, а также мембранные белки цитохром Р-450, эпоксидгидратаза, ретинальный опсин, гликопротеид РЕа вируса Синдбис. В этих случаях растущая полипептидная цепь тоже, по-видимому, имеет сигнальную последовательность, индуцирующую присоединение транслирующей рибосомы к мембране эндоплазматического ретику-лума и ко-трансляционный транспорт белка в мембрану, но без сопутствующего процессинга. Для цитохрома Р-450 показано, что его N-концевая последовательность гидрофобна и напоминает сигнальную, но она сохраняется у зрелого белка. Однако N-концевые последовательности овальбумина и опсина не похожи на обычную сигнальную последовательность. Возможно, что либо сигнальную роль здесь выполняют специальные внутренние гидрофобные участки растущего полипептида, либо не столь гидрофобная N-концевая последовательность тоже в каких-то случаях может служить сигналом для присоединения к мембране. Как и в других случаях, взаимодействие с мембраной возможно лишь в течение трансляции; но не после нее; очевидно, сворачивание завершенной цепи как-то блокирует ( экранирует) сигнальную функцию соответствующего участка.
Сюда относятся исследования Анфин-сена и сотрудников [597, 598, 664], посвященные образованию яичного белка в яйцеводе курицы. Синтезированный в организме из С14О2 яичный альбумин расщепляли при помощи субтилизина на пластинчатый альбумин ( плакальбумин) и пептиды. Было найдено, что метка аспарагиновой кислоты в пептидах выше метки аспарагиновой кислоты плакальбумина. В аналогичных опытах с мечеными аминокислотами было отмечено неравномерное распределение метки в остатках глутаминовой кислоты, глицина, аланина и серина. Кроме того, в аналогичных опытах с другими биологическими системами были получены противоположные результаты. Стайнберг указал на то, что в опытах с биосинтезом овальбумина неравномерная метка аминокислот наблюдается лишь при сравнительно кратковременных опытах; если инкубирование продолжается в течение 10 час.
Белок, сохраняющий свои характерные специфические свойства, называется нативным белком: гемоглобин в том виде, в каком он находится в эритроцитах или в тщательно приготовленном растворе гемоглобина, в котором он все еще продолжает сохранять свое свойство обратимо соединяться с кислородом, называется нативным гемоглобином. Многие белки очень легко теряют присущие им специфические свойства. Тогда говорят, что они денатурированы. Гемоглобин можно денатурировать просто нагреванием его раствора до 65 С. В результате такого нагревания он коагулирует, образуя нерастворимый коагулят кирпично-красно-го цвета. Большинство других белков также денатурируется при нагревании приблизительно до такой же температуры. При нагревании его раствора примерно до 65 С и выдерживании в течение некоторого времени при этой температуре овальбумин денатурируется, давая нерастворимый белый коагулят. Это явление наблюдается при варке яиц.
Приблизительно третья его часть элюировалась тем же самым буфером, но почти 20 мг белка оставались связанными, несмотря на интенсивную промывку, и могли быть отмыты, только когда возрастала ионная сила элюирующего раствора. Часть оставшегося на колонке белка отмывается 0 01 М трис - НС1 - буфером, однако большая часть белка отмывается 0 01 М трис - НС1 - буфером, содержащим 0 1 моль / л хлорида натрия, и очень небольшое количество белка - 0 1 М трис - НС1 - буфером, содержащим 1 0 моль / л хлорида натрия. Эти результаты указывают на то, что часть белка освобождается на каждом уровне ионной силы раствора, в то время как остальная часть остается необратимо связанной в данных условиях. Фракционирование одного и того же белка Хофсти объясняет негомогенностью связывающих центров адсорбента. Элюирование этого небольшого количества белка при помощи градиента ионной силы ( хлорид натрия) происходит растворами с концентрацией соли, соответствующей элюенту, снимающему с колонки последние остаточные количества прочно адсорбированного белка, в случае, когда на колонку наносилось большое количество овальбумина. Эти результаты означают, что некоторые сильносвязывающие центры занимаются белком в первую очередь и что некоторые другие участки с пониженной аффинностью занимаются при нанесении на колонку большего количества белка. Такие же результаты были получены и для других белков и красителя понсо S. Из этого следует, что при нанесении на колонку небольших количеств белков они связываются со специфическими сорбентами более гомогенно, чем при нанесении больших. Это может означать, что уменьшение количества наносимого белка способствует использованию преимущественно одного типа связывающих центров адсорбента.
 
Loading...
Loading
на заглавную 10 самыхСловариО сайтеОбратная связь к началу страницы

© 2008 - 2017
словарь online
электро бритва
словарь
одноклассники
XHTML | CSS
Лицензиар ngpedia.ru
1.8.11